人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)說明書

實驗原理：

   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)水平。用純化的人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL),再與HRP標記的中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 NGAL呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)濃度。

人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)說明書

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

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計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，    
在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD      
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋      
倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標      
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      
倍數，即為樣品的實際濃度。

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4244-84-2,β-*乙酯鹽,β-丙胺酸乙酯鹽,氨基乙酸乙酯,β-Alanine ethyl ester HC1
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9001-64-3,蘋果酸脫氫酶,Malate dehydrogenase,MDH
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