1、1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)
□組份濃度1MTris-HCl
□配制量1L
□配置方法1.稱量121.1gTris置于1L燒杯中。
2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
3.按下表量加入濃鹽酸調節所需要的pH值。
pH值濃HCl
7.4約70mL
7.6約60mL
8.0約42mL
4.將溶解定容至1L。
5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。
2、1.5MTris-HCl(pH8.8)
□組份濃度1.5MTris-HCl
□配制量1L
□配置方法1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。
2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
3.用濃鹽酸調pH值至8.8。
4.將溶液定容至1L。
5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。
3、10×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)
□組份濃度100mMTris-HCl,10mMEDTA
□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。
1MTris-HClBuffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL
500mMEDTA(pH8.0)20mL
2.向燒杯中加入約800mL的去離子水,均勻混合。
3.將溶液定至1L后,高溫高壓滅菌。
4.室溫保存。
4、3M醋酸鈉(pH5.2)
□組份濃度3M醋酸鈉
□配制量100mL
□配置方法1.稱取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL燒杯中,加入約40mL的去離子水攪拌溶解。
2.加入冰乙酸調節pH值至5.2。
3.加入去離子水將溶液定容至100mL。
4.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
5、PBSBuffer
□組份濃度137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4
□配制量1L
□配置方法1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中。
NaCl8g
KCl0.2g
Na2HPO41.42g
KH2PO40.27g
2.向燒杯中加入約800mL的去離子水,充分攪拌溶解。
3.滴加HCl將pH值調節至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1L。
4.高溫高壓滅菌后,室溫保存。
注意:上述PBSBuffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
6、10M醋酸銨
□組份濃度10M醋酸銨
□配制量100mL
□配置方法1.稱量77.1g醋酸銨置于100~200mL燒杯中,加入約30mL的去離子水攪拌溶解。
2.加去離子水將溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm濾膜過濾除菌。
4.密封瓶口于室溫保存。
注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。
7、Tris-HCl平衡*
□配置方法
1.使用原料:大多數市售液化*是清亮無色的,無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化*呈粉紅色或黃色,應避免使用。同時也應避免使用結晶*,結晶*必須在160℃對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產物,這些氧化產物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或導致RNA和DNA的交聯等。因此,*的質量對DNA、RNA的提取極為重要,我們推薦使用高質量的*進行分子生物學實驗。
2.操作注意:*腐蝕性*,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行,與*接觸過的皮膚部位應用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。
3.*平衡:因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相,因此使用*前必須對*進行平衡使其pH值達到7.8以上,*平衡操作方法如下:
①液化*應貯存于-20℃,此時的*呈現結晶狀態。從冰柜中取出的*首先在室溫下放置使其達到室溫,然后在68℃水浴中使*充分溶解。
②加入羥基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不*抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時因其呈黃色。有助于方便識別有機相。
③加入等體積的1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。
④重復操作步驟③。
⑤加入等體積的0.1MTris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。
⑥重復操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。
⑦使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。
⑧將*置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
13、20%(W/V)Glucose
□組份濃度20%(W/V)Glucose
□配制量100mL
□配置方法1.稱取20gGlucose置于100~200mL燒杯中,加入約80mL的去離子水后,攪拌溶解。
2.加去離子水將溶液定容至100mL。
3.高溫高壓滅菌后,4℃保存。
14、SolutionI(質粒提取用)
□組份濃度25mMTris-HCl(pH8.0),10mMEDTA,50mMGlucose
□配制量1L
□配置方法1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。
1MTris-HCl(pH8.0)25mL
0.5MEDTA(pH8.0)20mL
20%Glucose(1.11M)45mL
dH2O910mL
2.高溫高壓滅菌后,4℃保存。
3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA(20mg/mL)。
15、SolutionII(質粒提取用)
□組份濃度250mMNaOH,1%(W/V)SDS
□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL燒杯中。
10%SDS50mL
2NNaOH50mL
2.加滅菌水定容至500mL,充分混勻。
3.室溫保存。此溶液保存時間不要超過一個月。
注意:SDS易產生氣泡,不要劇烈攪拌。
16、SolutionIII(質粒提取用)
□組份濃度3MKOAc,5MCH3COOH
□配制量500mL
□配置方法1.量取下列溶液置于500mL燒杯中。
KOAc147g
CH3COOH57.5mL
2.加入300mL去離子水后攪拌溶解。
3.加去離子水將溶液定容至500mL。
4.高溫高壓滅菌后,4℃保存。
17、0.5MEDTA(pH8.0)
□組份濃度0.5MEDTA
□配制量1L
□配置方法1.稱取186.1gNa2EDTA•2H2O,置于1L燒杯中。
2.加入約800mL的去離子水,充分攪拌。
3.用NaOH調節pH值值8.0(約20gNaOH)。
注意:pH值至8.0時,EDTA才能*溶解。
4.加去離子水將溶液定容至1L。
5.適量分成小份后,高溫高壓滅菌。
6.室溫保存。
18、1MDTT
□組份濃度1MDTT
□配制量20mL
□配置方法1.稱取3.09gDTT,加入到50mL塑料離心管內。
2.加20mL的0.01M的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm濾器過濾除菌。
3.適量分成小份后,-20℃保存。
19、10mMATP
□組份濃度10mMATP
□配制量20mL
□配置方法1.稱取121mgNa2ATP•3H2O,加入到50mL塑料離心管內。
2.加20mL的25mMTris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。
3.適量分成小份,-20℃保存。
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