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上海哈靈生物科技有限公司
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公司信息
植物組織膜性囊泡（RSOV 和 IOV）制備試劑盒產品說明書
2024-12-19 閱讀(61)
一、主要用途
上海哈靈生物植物組織膜性囊泡（RSOV 和 IOV）制備試劑是一種旨在通過差速離心技術從植物組織中分離出各種正常外向膜性囊泡（Right - side out；RSOV）和內側外翻膜性囊泡（In - side out；IOV）組分的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明。其適合于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）、胚胎葉（cotyledon）、上胚軸（epicotyl）等膜性囊泡的制備。其制備物產量高，可用于膜通道、信號傳導機制、膜蛋白分布等研究。產品不含污染性蛋白酶，即到即用，性能穩定，分離產量和純度俱佳。
二、技術背景
上海哈靈生物膜性囊泡（membrane vesicle）分成正常外向膜性囊泡（Right - side out；RSOV）和內側外翻膜性囊泡（In - side out；IOV）。正常外向膜性囊泡是通過去除細胞漿內容物，使之失去內在的代謝系統，同時保持質膜的原始位相，有利于提供適合的底物，不會受到降解和代謝，建立動力機制，進行轉運或攝入研究，例如微粒體組分用于 V 型 ATP 酶研究、線粒體組分用于 F 型 ATP 酶研究。而內側外翻膜性囊泡是通過裂解細胞和細胞器后，質膜重新閉合形成內側面外翻的囊泡狀結構，廣泛用于原發性轉運系統的研究。
三、產品內容
清理液（Reagent A）：[X] 毫升
平衡液（Reagent B）：[X] 毫升
保存液（Reagent C）：[X] 毫升
產品說明書：1 份
四、保存方式
保存保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里。
其余的保存在 4℃冰箱里；有效保證 6 月。
五、用戶自備
15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器。
1.5 毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器。
4℃超速離心機：用于分離膜性囊泡。
DOUNCE 勻漿器：用于裂解組織。
六、實驗步驟
（一）正常外向膜性囊泡分離（線粒體和微粒體）
準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定 1 克組織重量。
（選擇步驟）放進預冷的 15 毫升錐形離心管。
（選擇步驟）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次。
移入一個液氮凍存管。
即刻放入液氮罐過夜。
次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）。
放進一個 15 毫升錐形離心管。
加入 xx 毫升預冷的平衡液（Reagent B）。
渦旋震蕩 5 秒，充分混勻。
即刻放入預冷的 DOUNCE 勻漿器。
在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）。
將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管。
放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1000g。
小心移出上清液到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管。
放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 10000g。
小心移出上清液到 2 個新的 1.5 毫升離心管，同時保留沉淀顆粒。
加入 xx 微升保存液（Reagent C）到沉淀顆粒管――
將含有上清液的 2 個 1.5 毫升離心管放進 4℃超速離心機離心 60 分鐘，速度為 100000g。
小心抽去上清液。
分別加入 xx 微升保存液（Reagent C）――
移取 10 微升進行蛋白質定量測定（注意：建議使用 Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒－30030.1）。
即刻放進－70℃冰箱里保存。
（二）內側外翻膜性囊泡分離（質膜分離）
準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定 1 克組織重量。
（選擇步驟）放進預冷的 15 毫升錐形離心管。
（選擇步驟）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次。
移入一個液氮凍存管。
即刻放入液氮罐過夜。
次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）。
放進一個 15 毫升錐形離心管。
加入 xx 毫升預冷的平衡液（Reagent B）。
渦旋震蕩 5 秒，充分混勻。
即刻放入預冷的 DOUNCE 勻漿器。
在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）。
將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管。
放進 4℃臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 1000g。
小心移出上清液到另一個新的預冷的 15 毫升錐形離心管。
放進 4℃臺式離心機離心 30 分鐘，速度為 10000g。
小心抽去上清液。
加入 xx 微升保存液（Reagent C）――
連續－70℃至 37℃凍融 4 次――
移取 10 微升進行蛋白質定量測定（注意：建議使用 Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒－30030.1）。
即刻放進－70℃冰箱里保存。
（選擇步驟）進行 IOV 組分純化（建議使用 IOV 膜性囊泡高質純化試劑盒－10170）。
七、注意事項
本產品為 20 次（1 克植物組織）操作。
所有操作均須在 4℃或以下狀態進行。
建議使用足夠的樣品量。
通常 1 克植物組織的微粒體組分含量為 50 毫克蛋白，線粒體組分含量 5 毫克蛋白，100 毫克質膜。
質膜 IOV 組分為粗提分離產物，其中含有 RSOV 和未予閉合的質膜不等，如果需要獲得 95％以上的高純度的 IOV，建議使用 IOV 膜性囊泡高質純化試劑盒－10170。
純化的樣品避免反復凍融。
本公司提供系列離子膜通道轉運功能（transport/uptake）分析試劑產品。
八、質量標準
本產品經鑒定性能穩定。
本產品經鑒定分離組分維持正常活性。
本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶。
