ELISA方法測(cè)定乙型肝炎五項(xiàng)指標(biāo)相關(guān)性分析
摘 要：目的：檢測(cè)乙型肝炎（乙肝）患者血清中HBV DNA的含量，了解其與免疫學(xué)指標(biāo)的關(guān)系。方法：采用熒光定量PCR技術(shù)和ELISA方法，分別檢測(cè)3 120例乙型肝炎患者血清中HBV DNA含量和免疫學(xué)指標(biāo)。結(jié)果：HBsAg、HBeAg、抗HBc陽(yáng)性組HBV DNA檢出率為96.8%，HBsAg、抗HBe、抗HBc陽(yáng)性組HBV DNA檢出率為51.5%，HBsAg、抗HBc陽(yáng)性組HBV DNA檢出率為48.5%，另抗HBs陽(yáng)性組陽(yáng)性率為3.1%，全陰組陽(yáng)性率為5.0%。不同乙肝五項(xiàng)指標(biāo)患者血清HBV DNA的檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：熒光定量PCR技術(shù)在乙肝診斷、治療過(guò)程監(jiān)測(cè)及藥效評(píng)價(jià)方面有應(yīng)用價(jià)值。
關(guān)鍵詞：乙型肝炎；熒光定量PCR
熒光定量PCR技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，能更準(zhǔn)確反映出HBV感染者血清中病毒含量，ELISA法檢測(cè)人體對(duì)乙型肝炎（乙肝）病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)。將兩者結(jié)合，分析HBV感染者整個(gè)病程中血清抗原、抗體的轉(zhuǎn)化過(guò)程及與HBV DNA的相關(guān)性。 1 資料與方法 1.1 一般資料：選取2011年1月～2011年12月我院住院、門(mén)診乙型肝炎患者、體檢者共3 120例及健康對(duì)照20例。男1 631例，女1 489例，年齡5～79歲，平均40.5歲。20例正常人乙肝五項(xiàng)指標(biāo)均陰性，肝功能正常。 1.2 HBV DNA熒光定量檢測(cè)：儀器采用ROTOR GENE 3000實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。HBV DNA試劑盒購(gòu)自購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。定量結(jié)果采用求算對(duì)數(shù)平均值的方法來(lái)計(jì)算HBV DNA平均拷貝數(shù)。 1.3 HBV免疫學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)：采用ELISA方法檢測(cè)HBV標(biāo)志物，ELISA試劑盒購(gòu)自廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司。 2 結(jié)果 根據(jù)乙肝五項(xiàng)指標(biāo)的不同，我們對(duì)3 120例血清標(biāo)本的分析結(jié)果做分組，并統(tǒng)計(jì)HBV DNA結(jié)果。詳見(jiàn)表1。表1 HBV DNA檢測(cè)結(jié)果與免疫學(xué)指標(biāo)結(jié)果的比較 乙肝五項(xiàng)指標(biāo) 例數(shù) HBV DNA陽(yáng)性數(shù)[例（%）] HBV DNA含量（IU/ml） 1.HBsAg、HBeAg、抗HBc陽(yáng)性組 1 148 1 111（96.8）① 7.94±0.34 2.HbsAg、抗Hbe、抗HBc陽(yáng)性組 1 357 699（51.5）② 4.57±2.07 3.HBsAg、抗HBc陽(yáng)性組 551 267（48.5）③ 4.33±1.12 4.抗HBs陽(yáng)性組 64 2（3.1） 3.96 5.陰性正常人血清 20 1（5.0） 3.11 注：②、③與①比較，P＜0.01 3 討論 我們對(duì)3 120例乙肝患者及體檢者、20例乙肝五項(xiàng)指標(biāo)陰性的健康對(duì)照同時(shí)進(jìn)行免疫學(xué)指標(biāo)和HBV DNA熒光定量PCR檢測(cè)。表中1組HBV DNA檢出率為96.8%，HBV DNA拷貝數(shù)也很高，說(shuō)明HBeAg（+）乙肝患者HBV處于大量復(fù)制階段，患者具有高度傳染性，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[1]。2組 HBV DNA檢出率為51.5%，3組HBV DNA檢出率為48.5%，HBV DNA拷貝數(shù)差異很大，說(shuō)明免疫學(xué)指標(biāo)結(jié)果相同的患者，其體內(nèi)HBV DNA濃度存在很大差異。2組HBV DNA檢出率達(dá)51.5%，HBV DNA含量較1組低，因此，系統(tǒng)轉(zhuǎn)換并不能說(shuō)明HBV停止復(fù)制，可能與病毒變異等因素有關(guān).說(shuō)明患者體內(nèi)是否有病毒復(fù)制及其拷貝數(shù)單靠ELISA方法檢測(cè)HBV標(biāo)志物是無(wú)法準(zhǔn)確判斷的，而必須進(jìn)行HBV DNA的定量檢測(cè)。抗HBs是保護(hù)性抗體，但本實(shí)驗(yàn)中64例抗HBs陽(yáng)性者中仍有2例檢出HBV DNA，這與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相符，說(shuō)明抗HBs陽(yáng)性者并非*沒(méi)有傳染性，因此對(duì)抗HBs陽(yáng)性者判斷其是否具有傳染性仍需通過(guò)檢測(cè)HBV DNA來(lái)加以分析[2]。 值得注意的是HBVM全陰的20例標(biāo)本中，有1例PCR陽(yáng)性.這種陽(yáng)性的存在，可能是病毒感染早期，抗原﹑抗體尚未形成；患者免疫功能低下，不產(chǎn)生免疫應(yīng)答或患者出現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象，ELISA無(wú)法測(cè)出相應(yīng)的抗原﹑抗體．或者是HBV s區(qū)基因變異致HbsAg抗原性變異，不能被ELISA方法檢出；或者前C區(qū)變異致不能產(chǎn)生HBeAg[3]。
