豬細小病毒試劑盒技術參數

時間：2013-5-2閱讀：592

豬細小病毒（CPV）Elisa試劑盒技術參數

使用目的：

本試劑盒定性測定豬血液、或其它相關組織中細小病毒（CPV）。

豬細小病毒（CPV）實驗原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中豬細小病毒（CPV）。用純化的豬細小病毒（CPV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中細小病毒（CPV）抗原相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的細小病毒（CPV）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中豬細小病毒（CPV）的存在與否。

試劑盒組成：

1	20倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	3ml×1瓶
2	酶標試劑	3ml×1/瓶	8	陽性對照	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×4條	9	陰性對照	0.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	3ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	3ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	3ml×1瓶	12	密封袋	1個

標本要求：

1．標本處理：血清、血漿標本可直接檢測

2．標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測，可將標本在-20℃保存一個月，但應避免反復凍融。

3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

豬細小病毒（CPV）操作步驟：

1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標準品）50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.15

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUT OFF）者為細小病毒（CPV）陰性

陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUT OFF）者為細小病毒（CPV）陽性

豬細小病毒（CPV）注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

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