人T淋巴細胞白血病1+2型病毒(HTLV 1+2)ELISA試劑盒操作步驟:                

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。                

1、 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。                

 2、 棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分鐘內配制），酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。                

 3、 棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。               

4、 每孔加HRP Conjugate工作液（臨用前15分鐘內配制）100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。                

 5、 棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。                

 6、 每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現明顯梯度時，即可終止）。                

 7、 每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。                

 8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。                

9、 實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。                

人T淋巴細胞白血病1+2型病毒(HTLV 1+2)ELISA試劑盒實驗操作注意事項：                

1、 保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊或旋緊以防止蒸發和微生物的污染，否則可能會出現錯誤的結果。                

 2、 酶標板：剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。               

3、 加樣：加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。每次的加樣時間控制在10分鐘內。*設置復孔實驗。

4、 溫育：為防止樣品蒸發，實驗時必須給酶標板覆膜；洗板后應盡快進行下步操作，避免酶標板處于干燥狀態；嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。                

5、 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水。在讀數前要注意清除孔底殘留的液體和手指印，以免影響酶標儀讀數。                

6、 試劑配制：Detection Ab及HRP Conjugate體積較小，運輸過程會使液體沾到管壁或瓶蓋，因此使用前請手甩幾下或1000轉/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。標準品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液請依據所需的量配制使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配制標準品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取Detection Ab時，一次不要小于10μl），以避免由于不準確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液。若需要分次使用標準品應按照每一次用量分裝，將其放在-20～-80℃貯存。避免反復凍融。                

7、 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如每隔5分鐘），如梯度已很明顯，請提前加入終止液終止反應，避免顏色過深影響酶標儀讀數。               

8、 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。                

9、  混勻：充分輕微混勻對反應結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微     量振蕩器，可在反應前手工輕輕敲擊酶標板框混勻。                

10、 安全：試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標      本時，請按國家生物試驗室安全防護條例執行。                

11、 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應終止液除外）               

12、 試驗中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴禁混用，否則將影響試驗結果！                

人T淋巴細胞白血病1+2型病毒(HTLV 1+2)ELISA試劑盒結果判斷:                

1. 每個標準品和標本的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。                

2. *使用專業的曲線制作軟件，如curve expert 1.3，在軟件界面既可根據樣品OD值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數；亦可用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，然后將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。                

3. 若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。