倍性育種,指通過改變染色體的數量,產生不同的變異個體,進而選擇性狀優良變異個體培育新品種。正常的配子細胞中所包含的染色體數或半數的體細胞染色體數稱為一套單倍染色體,用符號N表示。具有一個染色體組的細胞和由這樣的細胞組成的個體稱為單倍體(N) ,具有兩個染色體組的細胞或個體稱為二倍體(2N),具有兩個以上整套染色體組的細胞或個體則稱為多倍體,包括三倍體(3N)、四倍體(4N)等。
傳統的倍性鑒定主要采用常規壓片法鏡檢統計染色體數目,但采用這種方法很難尋找到分裂中期染色體分散良好并可進行計數的細胞,尤其是對于染色體條數眾多的物種,而且整個過程耗時長,檢測效率低。采用流式細胞術(Flow Cytometry,FCM)進行倍性分析大大提高了倍性分析的效率,幾分鐘就可以快速準確檢測同一物種范圍內不同倍性的樣品。FCM作為一項快速、高效的檢測技術,被廣泛應用于細胞分類學、植物遺傳學及植物生理學等研究領域中。
實驗原理
首先通過物理方法使動植物組織(植物一般是葉片,動物一般是血液或者肌肉組織)中的細胞游離出來,再加入裂解液將細胞中的細胞核釋放出來,并打開DNA鏈,然后用DAPI染液將細胞核DNA上的A-T堿基對特異性染色,再用儀器檢測被染色的A-T堿基對發出的熒光強度,這個熒光強度對應的就是一個細胞中DNA的含量。比如二倍體的熒光強度是50(橫坐標),那么四倍體的熒光強度就是100(橫坐標)。縱坐標是細胞數量的顯示。
實驗方法與檢測設備
我們采用配置紫外激光光源的Sysmex-Partec CyFlow倍性分析儀,搭配Sysmex CyStain DAPI倍性分析試劑盒(兩步法)和CellTrics濾網,在2min內即可完成一個樣本的檢測,為您提供高效、準確的檢測結果,并出具專業報告。實驗步驟如下:
1)在裂解液中物理破碎動植物組織,動物組織一般是用剪刀剪碎,植物一般是葉片用鋒利的雙面刀片切碎。不同的組織樣本處理的方法各不相同;
2)將帶有裂解液的破碎的組織樣本過細胞濾網(常用的為sysmex公司的30umCellTrics濾網)過濾以去除未切碎的組織塊;
3)加入4倍裂解液體積的染液,用手指輕彈混勻后上機檢測;
4)收集結果。
成功檢測案例
目前我們應用這種方法成功檢測倍性的植物有:草莓,蘭花,番茄,水稻,擬南芥,小麥,玉米,牡丹,芍藥,獼猴桃,馬鈴薯,谷子,紫薇,百合,月季,柑橘,枇杷等;動物有各種魚類,海參幼蟲,貝類等。
如果您有實驗服務需要,請聯系我們,我們將竭誠為您提供真實可靠的實驗技術服務。
:李經理,,deshidabj