測(cè)定化妝品中二十一種磺胺的液相色譜儀
二十一種磺胺物質(zhì)是我國(guó)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》貴的的禁用物質(zhì)，部分作為化妝品生產(chǎn)原料即添加組分添加到化妝品中。如果技術(shù)上無(wú)法避免禁用物質(zhì)作為雜志帶入化妝品時(shí)，測(cè)化妝品成品應(yīng)符合《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》對(duì)化妝品的一般要求，即在正常及合理的可預(yù)見(jiàn)的使用條件下，不得對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。
目前我國(guó)尚未規(guī)定這些物質(zhì)的值，本標(biāo)準(zhǔn)的定義，僅對(duì)化妝品中測(cè)定這些物質(zhì)提供檢測(cè)方法。
化妝品中二十一種磺胺的測(cè)定高效液相色譜法
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化妝品中二十一種磺胺的測(cè)定高效液相色譜法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于化妝品中二十一種磺胺的測(cè)定。
2 規(guī)范性文件
下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用貳成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。
GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法
3 原理
試樣經(jīng)溶劑提取，離心過(guò)濾后，用高效液相色譜測(cè)定，外標(biāo)法定量，液相色譜-質(zhì)譜確認(rèn)。
4 試劑和材料
除非另有說(shuō)明，所有試劑均分析純，水為GB/T 6682貴的的一級(jí)水。
4.1 甲醇：色譜純。
4.2 四氫呋喃：色譜純。
4.3 氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）：準(zhǔn)確稱(chēng)取4g氫氧化鈉于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。
4.4 甲酸溶液（0.1%）：準(zhǔn)確量取1ml甲酸于1L容量瓶中，用水定容至刻度，混勻后備用。
4.5 甲醇水溶液：準(zhǔn)確量取50ml甲醇和50ml水，混勻后備用。
4.6 磺胺胍、磺胺、、、、、、磺胺甲基吡啶、磺胺二甲噁唑、、磺胺間二甲嘧啶、磺胺唑噁啉、磺胺硝苯、磺胺甲噻二唑、、琥珀酰、、磺胺甲基異噁唑、、磺胺領(lǐng)苯二甲氧嘧啶、磺胺二甲異噁唑標(biāo)準(zhǔn)品：純度大于97%。
4.7 二十一中磺胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取每種磺胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（4.6）各100mg，分別置于100ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液（4.5）溶解并定容至刻度，搖勻，配置成濃度分別為1000ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃避光保存，可使用三個(gè)月
注磺胺噁唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配置時(shí)，可加入數(shù)滴氫氧化鈉溶液（4.3）輔助溶解。
4.8 二十一種磺胺的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確移取二十一種磺胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液歌4ml余100ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液（4.5）定容至刻度，該溶液中二十一中磺胺的濃度均為40ug/mL。
5 儀器和設(shè)備
5.1 高效液相色譜儀（HPLC STI500二元梯度）：配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。
5.2 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（LC-MS/MS）儀：配有電噴霧離子源（ESI）.
5.3 分析天平：感量為0.0001g和0.001g。
5.4 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min。
5.5 超聲波水浴。
5.6 具塞比色管：10ml。
5.7 具塞塑料離心管：10ml。
5.8 微孔濾膜：0.45um，有機(jī)相。
6 分析步驟
6.1 樣品處理
6.1.1 膏霜、乳業(yè)、水劑、散粉、香波類(lèi)樣品
稱(chēng)取1g（精確至0.001g）試樣于10Ml具塞比色管中，加入5ml甲醇，再加水至10ml，超聲提取20min。取部分溶液轉(zhuǎn)移至10Ml具塞比色管中，以不低于5000r/min離心15min，上清液經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，過(guò)濾液作為待測(cè)樣液。
注：如離心難以得上清液可加適量氯化鈉破乳。
6.1.2 唇膏類(lèi)樣品
稱(chēng)取1g（精確至0.001g）試樣于10Ml具塞比色管中，加入2ml四氫呋喃，超聲提取10Min，再加水至10Ml，超聲提取10min。取部分溶液轉(zhuǎn)移至10Ml具塞比色管中，以不低于5000r/min離心15min，上清液經(jīng)0.45um微孔濾膜過(guò)濾，過(guò)濾液作為待測(cè)樣液。
6.2 測(cè)定條件
高效液相色譜測(cè)定條件如下：
A，色譜柱：Vertex C18，5um,250mm×4.6mm（內(nèi)徑）。
B， 流動(dòng)相見(jiàn)表1.
C， 流速：1.0ml/min。
D，柱溫：32℃。
E， 波長(zhǎng)：268nm。
F， 進(jìn)樣量：20ul。
表1流動(dòng)相
| 步驟 | 時(shí)間/min | 甲醇溶液（0.1%）/% | 甲醇/% |
| 0 | 0.00 | 92 | 8 |
| 1 | 7.00 | 84 | 16 |
| 2 | 13.00 | 78 | 22 |
| 3 | 18.00 | 75 | 25 |
| 4 | 27.00 | 75 | 25 |
| 5 | 29.00 | 45 | 55 |
| 6 | 40.00 | 5 | 95 |
| 7 | 42.00 | 92 | 8 |
6.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制
用甲醇水溶液（4.5）將二十一種磺胺混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋得到的濃度為0.1ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，按6.2的測(cè)定條件濃度由低到高進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程。
二十一種磺胺標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見(jiàn)A.1
6.4 測(cè)定
按6.2的測(cè)定條件對(duì)待測(cè)樣液進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法定量。待測(cè)樣液中磺胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍內(nèi)，超過(guò)線(xiàn)性范圍測(cè)應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。必要時(shí)，陽(yáng)性樣品需要用液相色譜-質(zhì)譜確認(rèn)試驗(yàn)（參見(jiàn)附錄B）
6.5 空白試驗(yàn)
除不稱(chēng)取樣品外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。
7結(jié)果計(jì)算
結(jié)果按式（1）計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留2為小數(shù)（計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值）：
Wi=1000×Ci×V/m…..(1)
Wi—試樣中被測(cè)磺胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）
Ci—從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)上查出的樣液中被測(cè)磺胺的濃度，單位為ug/ml
V—樣液最終定容體積，單位L
m—試樣的質(zhì)量，單位g
8 檢出限和定量限
本標(biāo)準(zhǔn)的檢出限和定量：磺胺胍、磺胺、、、、、、磺胺甲基吡啶、磺胺二甲噁唑、、磺胺間二甲嘧啶、磺胺唑噁啉、磺胺硝苯的檢出限為0.2mg/kg，定量限為0.6mg/kg；磺胺甲噻二唑、、琥珀酰、、磺胺甲基異噁唑、、磺胺領(lǐng)苯二甲氧嘧啶、磺胺二甲異噁唑的檢出限為0.4mg/kg，定量限為1.2mg/kg。
9 回收率
在天津濃度為0.2mg/kg-40mg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在85%-110%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。
10 允許差
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
附錄B，詳細(xì)請(qǐng)電話(huà)咨詢(xún)：
關(guān)鍵詞：二十一種磺胺，高效液相色譜法，化妝品新規(guī)，GB/T 24800.6-2009
