淀粉分支酶(SBE)試劑盒,微板法
淀粉分支酶(SBE)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 淀粉分支酶（Starch branching enzyme，SBE）試劑盒說明書 （貨號：WS9350W 微板法 48 樣） 一、產品簡介： 淀粉分支酶（SBE，EC 2.4.1.18）是參與支鏈淀粉合成的關鍵酶之一，在淀粉生物合 成、優質農作物品種選育和品質遺傳改良研究中具有重要意義。 SBE 可使底物含量減少，從而降低底物與碘顯色劑形成的在 660nm 有吸收峰的藍 色復合物，一定時間內吸光度下降的百分率可以反映 SBE 酶活性的大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存要求 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 15mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下，使試劑落入底部，先加 1mL 蒸餾水混合均勻，再徐徐加入煮沸 （95℃）的蒸餾水 5mL，繼續煮沸 2min， 呈透明溶解狀態，待冷卻后使用。 試劑三 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 2mL×2 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、研缽、冰、蒸餾水。 四、淀粉分支酶（SBE）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。 4℃×12000rpm 離心 10min， 取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 660nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 10 10 （95℃煮沸 10min 的酶液） 試劑一 100 100 試劑二 50 50 37℃孵育 10min，沸水浴 2min，流水冷卻至室溫。 試劑三 400 400 試劑四 20 20 混勻，顯色 10min 后，取出 200μL 至 96 孔板中，于 660nm 處讀取 吸光值 A，ΔA＝A 對照管-A 測定管（每個測定管需設一個對照管）。 【注】若ΔA 差值較小，可加大樣本量。則改變后的加樣量 V1 需重新代入公式計算。 五、結果計算： 1、按照蛋白濃度計算： 酶活定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每毫克蛋白每降低 1％碘藍值為本試劑盒僅供科研使用 一個酶活性單位。 SBE 活性(U/mg prot)= ΔA /A 對照管×99%÷（V1×Cpr）=100×ΔA /A 對照管÷Cpr 2、按照樣本鮮重計算： 酶活定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每克組織每降低 1％碘藍值為一 個酶活性單位。 SBE 活性(U/g 鮮重)= ΔA /A 對照管×99%÷(W×V1÷V)= 100 ×ΔA /A 對照管÷W V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.01mL； W---樣本質量，g； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。 2
