一、細胞培養條件

二、細胞收到后處理

 收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置若干小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態，100×，200×各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行售后的依據。

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完培養液收集至離心管中，加入6ml完培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松）

三、細胞培養步驟

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右完培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

3）細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；

4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。

原代細胞較接近和能反映體內生長特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
　　原代細胞的培養，也叫初代培養，是從供體取得組織細胞在體外進行的*培養，是建立細胞系的*步，是一項基本技術。

HMC-1人肥大細胞的培養方法一般有以下4種：
　　① 組織塊培養法
　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
　　② 消化培養法
　　③ 懸浮細胞培養法
　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。
　　④器官培養
　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

HMC-1人肥大細胞的培養條件：
　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養
　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；
　　3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養；
　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%；
　　5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養；
　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發生脫落，漂浮；
　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；
　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養
　　1、原代培養時要盡量去除紅細胞；
　　2、短期培養，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行；
　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；
　　4、長期培養時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；
　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。