貓α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒
Felis Interferon α,IFN-α ELISA Kit
包裝:96T/48T
檢測標本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。
保存:2-8℃,一年。
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貓α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒 供應商:
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操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
血漿:
應根據試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液:
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。檢測細胞內的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀 釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS ,緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻 漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
試劑的準備
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
800 pg/ml (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 pg/ml (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 pg/ml (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pg/ml (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pg/ml (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 pg/ml (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。檢測細胞內的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀 釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS ,緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻 漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
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關鍵詞:洗板機