新學期開學*,現貨供應:B95-8 細胞,絨猴EBV 轉化的白細胞價格,詳細信息:
【細胞生長】:貼壁生長或懸浮生長
【細胞形態】:上皮樣、多形態細胞樣等形態
【規格】:5×1000000cells/瓶
【包裝】:內層無菌自封袋、防壓泡沫盒、外層防壓保溫氣泡袋、說明書。
【價格】:電詢/詢價。(或)
【發票】:增票/普票
【細胞傳代】:1:3 傳代
【細胞活力】:90%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
【細胞檢測】:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
【細胞凍存】:液氮凍存(基礎培養基+10%DMSO+20%FBS)
新學期開學*,現貨供應:“B95-8 細胞,絨猴EBV 轉化的白細胞價格 ”優質產品后,在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況:
如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,留10ml培養液繼續培養。
如果細胞已長滿(達80-90%),即可進行傳代,具體步驟如下:
1)棄去培養液,用PBS洗1-2次。
2)向瓶內加入1.0-2.0ml*液,再倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,吸取*,加含有6ml含10%的血清的培養液,輕輕吹打細胞。
3)加入等量的培養液,輕輕吹打混勻后吸出一半,分到新別的地方培養。
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新學期開學*,現貨供應:技術相關問答:
1、培養細胞時應使用5 % 或10% CO2?或根本沒有影響?
一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統, 而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2 濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,細胞培養時應使用10 % CO2;當培養基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時, 則應使用5 % CO2 培養細胞。
2、何時須更換培養基?
視細胞生長密度而定, 或遵照細胞株基本數據上之更換時間,按時更換培養基即可。
3、培養基中是否須添加抗生素?
除于特殊篩選系統中外, 一般正常培養狀態下, 培養基中不應添加任何抗生素。
4、附著性細胞繼代時所使用之trypsin-EDTA 濃度?應如何處理?
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中, 保存于–20 ℃,避免反復冷凍解凍造成trypsin 之活性降低, 并可減少污染之機會。
5、懸浮性細胞應如何繼代處理?
一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中, 稀釋細胞濃度即可, 若培養液太多時, 可將培養角瓶口端稍微抬高, 直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養角瓶, 加入新鮮培養基稀釋至適當濃度, 重復前述步驟即可。
6、欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應為多少轉速?
欲回收動物細胞, 其離心速率一般為300xg (約1,000rpm),5 - 10 分鐘, 過高之轉速, 將造成細胞死亡。
7、細胞之接種密度為何?SHZ-88大鼠乳腺癌細胞
依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。
8、細胞冷凍培養基之成份為何?
動物細胞冷凍保存時zui常使用的冷凍培養基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原來細胞生長用之新鮮培養基均勻混合之。注意:由于DMSO 稀釋時會放出大量熱能, 故不可將DMSO 直接加入細胞液中, 必須使用前先行配制完成。
9、DMSO 之等級和無菌過濾之方式為何?SHZ-88大鼠乳腺癌細胞
a D2650), 其本身即為無菌狀況, *次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中, 保存于4°C, 避免反復冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質, 并可減少污染之機會。若要過濾DMSO, 則須使用耐DMSO 之Nylon 材質濾膜。
10、冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase *儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase*儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
11、細胞欲冷凍保存時, 細胞冷凍管內應有多少細胞濃度?
冷凍管內細胞數目一般為1x106 cells/ml vial, 融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。
12、應如何避免細胞污染?
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好之細胞來源和培養基配制是減低污染之方法。
13、如果細胞發生微生物污染時,應如何處理?SHZ-88大鼠乳腺癌細胞
加入相應抗生素。直接滅菌后丟棄之。
14、支原體(mycoplasma) 污染的細胞, 是否能以肉眼觀察出異狀?
不能。除極有經驗之專家外,大多數遭受支原體污染的細胞株,無法以其外觀分辨之。
15、支原體污染會對細胞培養有何影響?
支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數, 代謝及研究之任一數據。故進行實驗前,必須確認細胞為mycoplasma-free,實驗結果之數據方有意義。
26、CO2 培養箱之水盤如何保持清潔?
定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。
27、為何培養基保存于4 ℃ 冰箱中, 顏色會偏暗紅色, 且pH值會越來越偏堿性?
培養基保存于4 ℃ 冰箱中, 培養基內之CO2 會逐漸溢出,造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果, 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時, 可以通入無菌過濾之CO2, 以調整pH 值。