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上海閃晶分子生物科技有限公司
RNAi (RNAinterference, RNA干擾)技術,即將與內源 mRNA 編碼區同源的小片段(19 -23bp)外源雙鏈 RNA(double s`tranded RNA )導入細胞中,通過一系列細胞內反應引發細胞中相應 mRNA 的降解,從而導致特定基因表達沉默的一種技術。
siRNA/shRNA質粒載體構建技術服務
RNAi (RNAinterference, RNA干擾)技術,即將與內源 mRNA 編碼區同源的小片段(19 -23bp)外源雙鏈 RNA(double s`tranded RNA )導入細胞中,通過一系列細胞內反應引發細胞中相應 mRNA 的降解,從而導致特定基因表達沉默的一種技術。RNAi的作用提供了一種經濟、快捷、高效的抑制特異基因表達的技術手段,有助于研究該基因在生物模型系統中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成為病毒性疾病、遺傳性疾病以及腫瘤等的基因治療研究的一種手段。
基本原理示意圖
siRNA/shRNA構建技術服務
本公司提供siRNA 載體的構建服務,siRNA 載體可以在細胞內直接轉錄出shRNA ,其干擾效果等同于siRNA ,而且能夠解決 siRNA干擾時間短的缺點。您只需提供需干擾基因的詳細信息,包括基因的 mRNA 序列,Genbank Accession No. 和所屬物種,本公司負責設計3條針對目的mRNA的siRNA 靶序列,在短時間內構建三個可用于目的mRNA干擾實驗的siRNA 載體。可以為您節省大量的時間與精力。此方法是多種siRNA制備方法中 一可以進行長期基因沉默研究的方法。
閃晶生物siRNA載體構建服務程序:
1. siRNA表達載體的選用:
本公司選用的siRNA 表達載體含 抗性基因和GFP綠色螢光標記,可以建立穩定表達系,同時可以實時監測載體在細胞中的轉染效率。載體中還含有Amp抗性基因,可以無限擴增。
2. 設計siRNA靶序列
A 、根據目的mRNA序列,設計3條RNA干擾靶序列,靶序列一般為19 - 21nt 長。
B 、對于每條選定的siRNA 靶序列,設計 siRNA 正義鏈和反義鏈,以 loop(9nt) 相連,稱為 shRNA(short hairpin RNA)。
C、陰性對照的設立.
3. 合成模板:
合成每條編碼 shRNA的DNA 模板的兩條單鏈,退火 DNA 單鏈得到 shRNA 的 DNA 雙鏈模板。模板鏈后面接有RNA PolyIII聚合酶轉錄中止位點,同時兩端分別設計 BamHI 和 HindIII 酶切位點,可以克隆到 siRNA 載體多克隆位點的 BamHI 和 HindIII 酶切位點之間。
4. siRNA 空載體用BamHI和HindIII雙酶切后,1 %瓊脂糖凝膠電泳,回收線性載體。
5. 連接與轉化:
把退火的DNA模板雙鏈連接到線性載體中。采用T4連接酶,插入片斷與載體的摩爾比約為 3 : 1 。連接產物轉化DH5α大腸桿菌,在LB Amp培養基上涂板,37 ℃培養過夜。
6. PCR 鑒定
7. 測序鑒定
8.柱抽提陽性克隆載體并定量。
收費標準 siRNA載體構建訂單下載
個數 | 價格(¥) | 時間 |
1-3個siRNA表達載體構建 | 1800.00/個 | 14個工作日 |
4-10個siRNA表達載體構建 | 1500.00/個 | 20個工作日 |
10個以上 | 協商 | 協商 |
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