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上海邦景實業有限公司

主營產品: 進口elisa試劑盒,細胞株,細胞系,菌種

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原代支持細胞添加劑
原代支持細胞添加劑
參考價1756
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    上海市

規格
5ML(100X)1756元15 瓶 可售

更新時間:2024-03-13 15:01:58瀏覽次數:286

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【簡單介紹】
規格 5ML(100X) 產品別名 原代支持細胞添加劑
貨號 BJ-X2430 用途 僅用于科研、不得用于臨床
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細胞傳代培養操作步驟如下:

1)傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態和生長密度,當細胞生長密度達到80%~90%時,即可進行傳代。

2)吸掉或倒掉培養瓶內的培養液。加入PBS清洗1~2次,左右輕輕搖晃后棄掉。

3)根據培養瓶大小向瓶內加入適量含EDTA的,一般應覆蓋整個培養瓶底。

4)把培養瓶放入37℃ CO2培養箱進行消化,2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察,當發現有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時,再輕輕拍打培養瓶使剩余細胞脫落,然后立即加入2倍量的培養液中止消化,使用吸頭輕輕吹打,混合均勻,以防消化過度。

5)吸出所有細胞懸液至離心管內,1000rpm/min離心3~5min

6)棄上清,加入適量培養液重懸細胞,輕輕吹打混勻,使細胞均勻分散。

7)用吸頭吸取適量細胞懸液,以適宜的密度接種于新的培養瓶中,補足培養液,搖勻,放置于37℃ CO2培養箱中進行培養。

8)根據細胞生長狀態確定換液或傳代時間,甚至進行細胞凍存。

產品簡介:

產品名稱

規格

貨號

原代支持細胞添加劑

5ML(100X)

BJ-X2430

 

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細胞培養具體步驟:

一、常用設備

1. 準備室的設備

單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜(放置未消毒物品)、儲品柜(放置消毒過的物品)、包裝臺。配液室的設備:扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(測量培養用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。

2. 培養室的設備

液氮罐、儲品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統、低溫冰箱(-80℃)、空調、二氧化碳缸瓶、邊臺(書寫實驗記錄)。

3. 必須放在無菌間的設備

離心機(收集細胞)、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱(放置serum和培養用液)。

二、無菌操作

(一)無菌室的滅菌

1.定期打掃無菌室:每周打掃一次,先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等,然后用3‰來蘇爾或新潔爾滅或0.5%過氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱(培養箱)滅菌:先用3‰新潔爾滅擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸,再用紫外燈照射。

3.實驗前滅菌:打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統各20-30分鐘。

4.實驗后滅菌:用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。

細胞培養方法:

01 原代培養操作步驟

原代培養的操作步驟為:取材分離培養。

1)取材:對于不同的組織有不同的取材方法,但均應保持材料的新鮮及嚴格無菌。

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注意事項:

1)嚴格進行無菌操作,所用一切試劑及耗材均應無菌,且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上,以免細胞發生污染。

2)所用培養液必須適宜細胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細胞,對培養液的要求不一樣,必要時可用預實驗的方法選擇適當的培養液。

3)胎牛血清對于維持細胞生存,促進細胞生長起著關鍵作用。可根據文獻或預實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定,就應保持用至實驗完成。

4)消化細胞時應避免消化時間過短導致消化不,收集到的細胞數量少,或消化時間過長導致細胞成團塊樣絮狀游離,這時的細胞已有損傷或死亡,影響細胞數量和實驗進度。

5)細胞離心的時候應避免離心力過小收集的細胞數量不夠,或離心力過大對細胞產生損傷。離心后的細胞沉淀棄去上清后,應先彈散細胞沉淀,再加入培養液重懸,這樣比直接吹打對細胞損傷小,可以提高細胞活率。

6)吹打細胞時應盡量避免細胞的產生,以免損傷細胞,影響細胞狀態(吹打過程中殘留部分液體在吸頭內可以減少氣泡的產生)。

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