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南京科捷檢測科技發展有限公司
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閱讀：852發布時間：2020-7-28
金銀花為名貴中藥材之一，具有清熱解毒，疏散風熱等功效，自古以來，就被民間廣泛使用。金銀花葉作為金銀花藥材的一種副產物，產量較大，但長期以來都作為非藥用部分而未得到利用。研究表明，金銀花和金銀花葉中都含有一定量的黃酮，這些黃酮類物質具有抗炎、抗高血壓、抗癌等藥理作用，是金銀花及葉中的主要活性成分之一。目前黃酮類化合物的測定方法有紫外分光光度法、鋁鹽顯色分光光度法、梯度洗脫反相高效液相色譜法等，而且主要以分光光度法為主測定總黃酮的含量。應用高效液相色譜法測定的還較少。本實驗采用反相高效液相色譜法，直接對金銀花及葉中的黃酮類物質槲皮素和木犀草素進行分離與測定，方法簡便快速，結果可靠，為金銀花及葉中黃酮類物質的研究提供了參考。
儀器準備
儀器簡介
LC-600A智能全控液相色譜系統由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構成等度分析系統。使用WS600工作站可以同時控制數臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等，實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。
應用領域
化合物檢測、法醫毒物分析、蛋白質組學食品檢測、藥物分析、環境分析、聚合物分析
供試品溶液制備：
分別稱取5g經過干燥粉碎的金銀花和金銀花葉各一份，用100ml甲醇在40℃超聲提取30min，過濾，減壓濃縮，濃縮液用石油醚除雜，然后用甲醇定容至25ml容量瓶，即得到金銀花和金銀花葉的供試品溶液。
色譜條件：
色譜柱 | Zorbax 80A，Extend c18柱（4.6mm×250mm×5μm） |
流動相 | 甲醇：0.02%磷酸（50:50） |
流速 | 1.0mL/min |
檢測波長 | 350nm |
柱溫 | 30℃ |
進樣量 | 10μL |
測定結果：
分別對槲皮素和木犀草素的對照品溶液在200-900nm進行紫外掃描，二者的**大和次大吸收峰分別在350nm和255nm，由于在350nm吸收**強，且干擾較少，故選用350nm作為檢測波長。在實驗時，用甲醇超聲提取金銀花和金銀花葉中的黃酮類化合物，然后過濾，減壓濃縮，濃縮液用石油醚除雜后定容檢測，這樣得到的色譜峰形好，雜質峰較少，比直接將濃縮液定容檢測效果要理想。
本研究表明，采用反相高效液相色譜法直接對金銀花及葉中的黃酮類物質槲皮素和木犀草素進行分離與測定，此方法簡便快捷，結果可靠。
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