人抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit代測(cè)
ELISA小常識(shí):ELISA試驗(yàn)條件固相載體的選擇:載體的種類比較多,其中包括纖維素、交聯(lián)右旋糖酐、葡萄球菌聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等。從使用形式上可有凹孔平板、試管、珠粒等。聚苯乙烯凹孔板是應(yīng)用zui廣泛的一種載體。聚苯乙烯塑料微量滴定板吸附蛋白的性能好,操作簡(jiǎn)便、用量小,適于大批檢查。由于聚苯乙烯的工藝過程不是很穩(wěn)定,造成各批次差異比較大。所以進(jìn)行ELISA之前,必須進(jìn)行篩選。檢查方法:⑴ 吸附性能的檢查:先加抗體包被,然后加入同一稀釋度的酶標(biāo)抗體,zui后加底物、顯色、測(cè)OD值,求出總平均OD值,再求出每相鄰兩孔的OD平均值,此均值在總均值的±10%以內(nèi)為合格,若中間孔與四周孔OD值相差太大,或一側(cè)與另一側(cè)孔OD值相差較大均屬不合格。⑵ 對(duì)比測(cè)定陽性血清與陰性血清,觀察是否存在明顯差異,若二者OD值相差于10倍以上者為合格。板的處理。新板一般不用處理,用蒸餾水沖洗即可應(yīng)用。板用一次即廢。但不少實(shí)驗(yàn)工作者認(rèn)為用超聲波處理,清潔液Tritonx100、20%乙二醇處理仍可應(yīng)用。但發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照顯色較深和陽性樣品顯色結(jié)果不理想時(shí),應(yīng)放棄不用。
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ELISA試劑盒的清洗操作注意事項(xiàng)
(1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
(2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
(3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
(4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
(5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
(6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
(7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
(8)加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
(9)按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
人抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA Kit代測(cè)
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